超低温冰箱在高山冰缘植物抗冻蛋白分离的应用

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抗冻蛋白最早是在南极鱼中发现的，是一类特殊的蛋白质，可以抑制冰晶的生长。由于抗冻蛋白的分布不普遍，很难从特定的植物中找到它们，传统的质外体提取技术也难以掌握。

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首先用液氮将高山红景天、高山早熟禾、高山离子芥末和蓼芽的叶子用液氮研磨，然后将研磨得到的粉末与PH8.0的磷酸盐缓冲液混合。 , 12000g 离心 10 分钟，取上清液，即可溶性蛋白粗提液，将 45ml 粗提液放入 50ml 小烧杯 5 中，置于层析冷冻箱中，4℃低温保存供以后使用。使用高压氮气通过减压阀 2 沿导管 3 流经压力为 0.1 MPa 的液氮对探头进行预冷。将探针浸入装有粗蛋白提取物的50ml小烧杯5中进行冷冻吸附，并在其中放置转子进行磁力搅拌。溶液是均匀的。



当烧杯中的液位下降5ml时，取出冷冻冰探针7，室温下融化冰晶，加入磷酸盐缓冲液至45ml，用探针冷冻冰重复吸附一次。第二次冷冻冰的冰晶在室温下融化，用截止为5000道尔顿的透析袋在去离子水中脱盐12小时，每2小时换一次水。浓缩蛋白溶液浓度采用考马斯亮蓝G250比色法测定，以BSA为标准曲线。将定量的蛋白质用20%蔗糖溶液稀释至1 mg/L和5 mg/L的浓度，滴到载玻片上，盖上盖玻片，压成均匀的液膜。将胶片放入上海天丰-70℃超低温冰箱30分钟后冷冻，将胶片11迅速通过塑料发泡板13的操作口放在显微镜9的载物台上，通过操作观察摄影目镜观察口 10、在盖玻片上加一滴二甲苯，用100倍油镜观察，调整视野，重结晶15分钟后把相机放在相机上记录，发现高山离子芥菜和何首乌芽有抑制再结晶的活性。



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