超低温冰箱在微生物冷冻保存的应用

为了保存，微生物被保持在冷冻状态以停止它们的新陈代谢。大多数微生物可以通过冷冻保存，较大的细胞比较小的细胞对低温更敏感，而没有细胞壁的微生物比有细胞壁的微生物更敏感。原因是低温会使细胞内的水形成冰晶，从而对细胞，尤其是细胞膜造成损害。冷冻时，适当采用速冻的方法，可减少因产生的小冰晶对细胞的伤害。当从低温中取出并开始升温时，冰晶又会长大，所以快速升温也可以减少对细胞的伤害。冷冻培养基对细胞损伤也有显着影响。例如，约0.5mol/L的甘油或二甲基亚砜可以穿透细胞，通过减少强脱水来保护细胞；糊精、血清白蛋白、脱脂牛奶或聚乙烯吡咯烷酮（PVP）等大分子物质不能穿透细胞，但可以通过与细胞表面结合来防止细胞膜冻结。因此，采用冷冻法保存菌种时，一般应加入各种保护剂，以提高培养物的成活率。

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一般来说，保鲜温度越低，保鲜效果越好。在常用的冷冻保存方法中，液氮储存可达-196℃。因此，从微生物的适用范围、存活期、性状稳定性等方面来说，该方法是目前使用的各种微生物保存方法中较为理想的一种。但液氮保鲜需要使用设备，一般只适用于一些专业的保鲜机构。相应地，超低温冰箱的保存和使??用更为普遍。例如，在各种基因工程手册中，一般建议将某些特殊生理状态（添加甘油作为保护剂）的菌株或细胞储存在-70℃的超低温冰箱中，例如已经过诱导建立感受态细胞。在没有超温冰箱的情况下，也可以使用-20~30℃的普通冰箱来保存细菌。但需要注意的是，细胞混合物与保护剂的共晶点在这个温度范围内，这往往会因可能发生的微小温度变化而引起培养物的反复熔化和重结晶，从而对细胞造成强烈的伤害。在冰箱里。因此，使用普通冰箱冷冻保存细菌的效果往往比超低温冰箱低很多，要注意经常检查保鲜的成活情况，随时转移种子。



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